Millipore密理博3KD超濾離心管 UFC900396

使用注意事項(xiàng)

（1）選擇合適的超濾管。通常應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。認(rèn)真閱讀使用說(shuō)明書(shū)，注意超濾膜對(duì)各種化學(xué)物質(zhì)的耐受程度有所不同。
（2）新買(mǎi)來(lái)的超濾是干燥的，使用前加入超純水，水量*過(guò)膜，冰浴或冰箱里預(yù)冷幾分鐘。然后將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過(guò)管頂?shù)陌拙€(xiàn)為準(zhǔn)。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預(yù)冷。
（3）平衡。質(zhì)量和重心二者都要達(dá)到平衡。注意轉(zhuǎn)速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。開(kāi)始離心超濾（離心機(jī)預(yù)冷至4度）。不同離心機(jī)的轉(zhuǎn)速 rpm換算成g之后，有所不同。離心機(jī)的加速度調(diào)至zui低檔，減小對(duì)膜的壓力。注意，一定要等離心機(jī)達(dá)到目的轉(zhuǎn)速之后，方可離開(kāi)離心機(jī)，否則離心機(jī)出問(wèn)題時(shí)，無(wú)法*時(shí)間處理。膜與轉(zhuǎn)軸的方向根據(jù)說(shuō)明書(shū)調(diào)整（角轉(zhuǎn)離心機(jī)的情況是膜與軸垂直）。在實(shí)際使用中，一般轉(zhuǎn)速開(kāi)的比說(shuō)明書(shū)里的要低，這樣可以延長(zhǎng)離心管的使用壽命。
（4）當(dāng)濃縮到剩下1ml時(shí)，取50ul緩沖溶液，加入10ul流穿，看有沒(méi)變藍(lán)色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開(kāi)始超濾。要精確判斷是否漏管，用5mgml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測(cè)，繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止。離心過(guò)程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀，導(dǎo)致堵管。若發(fā)生沉淀，要確定沉淀的具體原因，是蛋白濃度過(guò)高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾管同時(shí)超濾，降低濃度的辦法解決，后者的方法是換不同的緩沖溶液，直到蛋白不發(fā)生沉淀為止。
（5）前面幾步用以濃縮蛋白，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時(shí)候，輕輕加入新的Buffer（經(jīng)0.22um超濾膜超濾），再 濃縮至1ml左右，連續(xù)三次，zui后一次的濃縮終體積根據(jù)需要的蛋白濃度而定，一般不多于500ul，也有濃縮至200ul以?xún)?nèi)的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算，三次達(dá)到1000倍以上，基本上可以達(dá)到換buffer的目的。

 應(yīng)用
●●濃縮含有抗原、抗體、酶、核酸（單株或雙株DNA/RNA樣本）、微生物、洗出液和凈化樣本
的生物樣本
●●凈化組織培養(yǎng)基提取液和細(xì)胞溶解液中的大分子成分，從反應(yīng)混合液中去除引物、連接或
分子標(biāo)記，在HPLC之前去除蛋白質(zhì)
●●除鹽、更換緩沖液或滲濾

所提供的材料
Amicon? Ultra-4裝置包括一個(gè)蓋子、一個(gè)過(guò)濾器和一個(gè)離心管。

所需設(shè)備
●●帶有擺桶式或定角式轉(zhuǎn)子的離心器以及可以容納17 mm × 124 mm 15 mL錐底試管的
樣本腔/試管座
注意： 為了避免在離心過(guò)程中損壞裝置，在旋轉(zhuǎn)前請(qǐng)檢查間隙。
●●帶有200微升（μL）*的移液管，用于濃縮液回收

適用性
為確保對(duì)預(yù)定用途的適用性，建議進(jìn)行初步的回收和截留試驗(yàn)。 請(qǐng)參見(jiàn)“如何量化回收”
部分。

裝置儲(chǔ)存與保質(zhì)期
儲(chǔ)存在15–30 °C下。保質(zhì)期自生產(chǎn)之日起3年。密理博3KD超濾管UFC900396

1、Amicon Ultra系列離心超濾管，可用于生物樣品純化、蛋白質(zhì)濃縮、脫鹽和緩沖液更換，垂直結(jié)構(gòu)的膜減少了濃差極化，快速離心并可直接吸取回收樣本，濃縮倍數(shù)高達(dá)80-100 倍，是樣本處理的得力助手。
超濾管分為0.5ml、4ml、15ml三種上樣體積，并有3kd、10kd、30kd、50kd、100kd五種截留分子量。
2、產(chǎn)品訂購(gòu)信息：
Amicon Ultra-0.5系列（貨號(hào)：UFC500396、UFC501096、UFC503096、UFC505096、UFC510096）
Amicon Ultra-4系列（貨號(hào)：UFC800396、UFC801096、UFC803096、UFC805096、UFC810096）
Amicon Ultra-15系列（貨號(hào)：UFC900396、UFC901096、UFC903096、UFC905096、UFC910096）

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